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本試劑盒采用雙抗體夾心法，雙抗體夾心原理，是基于要測試的抗原具有二價以上的特性，能識別包被抗體，同時能識別檢測抗體，具體過程如下：
（1）將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體，洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)，并用無關蛋白封閉空余結(jié)合位點。
（2）加受檢標本使之與固相抗體接觸反應一段時間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。
（3）加生物素標記抗體，使固相免疫復合物上的抗原與生物素標記抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的生物素標記抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量正相關。
（4）加辣根過氧化物酶標記親和素，使生物素標記抗體與辣根過氧化物酶標記的親和素結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標記物。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量正相關。
（5）加入底物顯色，即可計算標本濃度。
（6）注：一個抗體分子上可以標記上若干個生物素分子，一個生物素分子可以結(jié)合一個辣根過氧化物酶標記的親和素，從而帶來了大量的辣根過氧化物酶結(jié)合到抗體上，比傳統(tǒng)的直接辣根過氧化物酶標記抗體具有更高的敏感性和放大效應。

【人1,3-BPG酶聯(lián)免疫試劑盒檢測原理】 
本實驗采用雙抗體夾心ELISA法。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（ELISA）。預先包被的抗體為抗人1,3-BPG單克隆抗體。檢測相抗體為多克隆抗體，經(jīng)生物素（biotin）標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應；經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關。