人白介素1受體拮抗劑是一類藥物,用于干預(yù)免疫系統(tǒng)過(guò)度活躍引起的炎癥反應(yīng)。它們通過(guò)阻斷人白介素1受體的結(jié)合作用,抑制白介素1信號(hào)通路的傳遞。白介素1(IL-1)是一種細(xì)胞因子,參與調(diào)節(jié)炎癥和免疫反應(yīng)。當(dāng)機(jī)體免疫系統(tǒng)異常激活時(shí),過(guò)量的IL-1會(huì)導(dǎo)致炎癥反應(yīng)過(guò)度增強(qiáng),進(jìn)而引發(fā)疾病如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、炎癥性腸病等。
人白介素1受體拮抗劑通過(guò)與白介素1受體結(jié)合,阻斷IL-1的結(jié)合和信號(hào)傳遞,從而減輕炎癥反應(yīng)。這些藥物可以減少炎癥細(xì)胞釋放的炎性介質(zhì),抑制炎癥基因的表達(dá),并且還能改善相關(guān)癥狀。它們?cè)谥委熥陨砻庖咝约膊『推渌c炎癥有關(guān)的疾病中發(fā)揮重要作用,例如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎等。
【白介素1受體拮抗劑洗滌方法】
1.自動(dòng)洗板機(jī):要求注入的洗滌液為350μl,注入與吸出間隔20-30秒。確保機(jī)器運(yùn)用熟練后,再投入實(shí)驗(yàn)中使用。
2.手工洗板:每孔加洗滌液350μl,靜置30秒后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干。手工洗板時(shí),注意加入洗液的過(guò)程中,不要造成孔間污染,從而出現(xiàn)跳孔的現(xiàn)象。
【白介素1受體拮抗劑操作步驟】
從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗(yàn)所需板條,未用的板條和干燥劑請(qǐng)放回鋁箔袋內(nèi)封存于2-8℃。
預(yù)留空白孔(若使用雙波長(zhǎng)讀板,空白孔可以不設(shè))。
分別將標(biāo)本或不同濃度人RANKL標(biāo)準(zhǔn)品(0pg/ml孔加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液)加入相應(yīng)孔中(100μl/孔),用封板膠紙封住反應(yīng)孔,37℃孵箱孵育90分鐘。
提前30分鐘制備生物化人RANKL抗體工作液。
洗板3次。
加入生物化人RANKL抗體工作液(100μl/孔)。用封板膠紙封住反應(yīng)孔,37℃孵箱孵育60分鐘。
提前30分鐘制備酶結(jié)合物工作液。室溫避光放置。
洗板3次。
除空白孔外,加入酶結(jié)合物工作液(100μl/孔)。用封板膠紙封住反應(yīng)孔,37℃孵箱,避光孵育30分鐘。
洗板5次。
加入TMB顯色工作液(包括空白孔)100μl/孔,37℃孵箱,避光孵育,當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)曲線高濃度的顏色較深,有明顯的顏色梯度的時(shí)候,即可終止。試驗(yàn)顯色反應(yīng)請(qǐng)勿超過(guò)30分鐘。
加入終止液(包括空白孔)100μl/孔,混勻后即刻測(cè)量OD(450nm)值(10分鐘內(nèi))。
【結(jié)果判斷】
1.每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的OD值應(yīng)減去零孔的OD值。(若不減零孔值,標(biāo)準(zhǔn)曲線的零孔應(yīng)相交于Y軸)
2.手工繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),OD值作縱坐標(biāo),以平滑線連接各標(biāo)準(zhǔn)品的坐標(biāo)點(diǎn)。通過(guò)標(biāo)本的OD值可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度。使用專業(yè)制作曲線軟件進(jìn)行分析,如curve expert 1.3進(jìn)行結(jié)果計(jì)算。
3.若標(biāo)本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限,應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測(cè),計(jì)算濃度時(shí)應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。
注意:本圖僅供參考,應(yīng)以同次試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)計(jì)算標(biāo)本含量。
【操作程序總結(jié)】
準(zhǔn)備試劑,樣品和標(biāo)準(zhǔn)品