本試劑盒采用雙抗體夾心法,雙抗體夾心原理,是基于要測(cè)試的抗原具有二價(jià)以上的特性,能識(shí)別包被抗體,同時(shí)能識(shí)別檢測(cè)抗體,具體過程如下:
(1)將特異性抗體與固相載體連接,形成固相抗體,洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì),并用無關(guān)蛋白封閉空余結(jié)合位點(diǎn)。
(2)加受檢標(biāo)本使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時(shí)間,讓標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合,形成固相抗原復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。
(3)加生物素標(biāo)記抗體,使固相免疫復(fù)合物上的抗原與生物素標(biāo)記抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的生物素標(biāo)記抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。
(4)加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素,使生物素標(biāo)記抗體與辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)記物。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。
(5)加入底物顯色,即可計(jì)算標(biāo)本濃度。
(6)注:一個(gè)抗體分子上可以標(biāo)記上若干個(gè)生物素分子,一個(gè)生物素分子可以結(jié)合一個(gè)辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素,從而帶來了大量的辣根過氧化物酶結(jié)合到抗體上,比傳統(tǒng)的直接辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體具有更高的敏感性和放大效應(yīng)。
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