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標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清主要運(yùn)用于細(xì)胞的培養(yǎng),在這個(gè)過程中zui為重要的就是保證培養(yǎng)不受污染,有時(shí)候需要一定的滅活處理。在對(duì)胎牛血清滅活這個(gè)問題中很多人存在不同的見解。
熱滅活目的是為了去除血清中補(bǔ)體等對(duì)熱敏感的物質(zhì),在對(duì)補(bǔ)體滅活以外,還可去除血清中的支原體的污染。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,而時(shí)間則從15分鐘到60分鐘不等,其中*常用的就是56℃熱處理30分鐘。現(xiàn)在好像不主張熱滅活,熱滅活經(jīng)常給血清產(chǎn)品帶來負(fù)面影響,對(duì)血清的加熱經(jīng)常導(dǎo)致血清中沉淀的產(chǎn)生,此外,有研究結(jié)果證實(shí)熱滅活步驟減弱了標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清和小牛血清對(duì)細(xì)胞的促粘附作用。
標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清的制備流程非常嚴(yán)格,放心使用
1、血清來源:可從世界各國(guó)收集胎牛血清,但是必須符合他的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。地方當(dāng)局還不清楚本地是否有牛海綿狀病毒流行的血清不收集,有說明血清質(zhì)量的證明資料:包括收集過程的全部資料、檢驗(yàn)結(jié)果和交付情況。
2、血清的收集:是心臟穿刺取血,新生牛(10~14天)和小牛(10個(gè)月內(nèi))血清靜脈取血。血清采集條件必須符合工業(yè)生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn):低溫下采集、一次分離、分離后立即混合凍存。符合要求的血清56℃水浴30分鐘滅活。
3、血清的制備:
a.超低IgG:通過親和層析工藝去除胎牛血清中的γ球蛋白,使FBSγ球蛋白含量減到zui低,一般IgG≤5ug/ml,生物學(xué)活性不變。
b.血清透析:用12000~14000分子量的透析膜在0.15M NaCl中透析直到使葡萄糖含量<0.5mg/ml(用葡萄糖氧化酶/過氧化酶方法測(cè)定)。
c.γ-射線照射:已經(jīng)證明γ-射線照射可以有效滅活血清中可能污染的病毒、支原體。照射劑量為30~45KG。而且這個(gè)劑量的γ-射線照射不會(huì)改變血清的理化性質(zhì)和對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的影響。
4、除菌過濾:經(jīng)過上述處理的粗制血清再經(jīng)過一系列除菌濾膜過濾包括0.2微米(micron)和0.1微米濾膜。FBS要通過三層0.1微米濾膜,其他血清可通過0.2微米濾膜。
標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清優(yōu)勢(shì):
1.指標(biāo)好,內(nèi)毒素低,利于細(xì)胞的生長(zhǎng),不會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞過早的凋亡,有利于下游產(chǎn)物的純化。
2.血清種類齊全,可以滿足所有血清用戶的需求。
3.多種血清都提供了熱滅活的包裝,減少了實(shí)驗(yàn)室自行熱滅活的工作,并降低了熱滅活對(duì)血清的負(fù)面影響。
4.胚胎干細(xì)胞血清及TET系統(tǒng)血清都經(jīng)過相關(guān)實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格篩選及驗(yàn)證,質(zhì)量安全。