半抗原偶聯(lián)試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí)需要留神哪些事項(xiàng)
更新時(shí)間:2019-03-27 點(diǎn)擊次數(shù):1098次
為了成功的操作半抗原偶聯(lián)試劑盒,需要在確立穩(wěn)健的多色配色方案,確定正確對(duì)照和進(jìn)行重復(fù)性好的分析上花費(fèi)大量的時(shí)間和精力。除了資源共享實(shí)驗(yàn)室和核心設(shè)備花費(fèi)大量的時(shí)間在儀器質(zhì)量控制上,研究人員也會(huì)把質(zhì)量控制結(jié)合進(jìn)他們的實(shí)驗(yàn)中。質(zhì)量控制管能實(shí)現(xiàn)確保實(shí)驗(yàn)之間的PMT電壓一致,能確保實(shí)驗(yàn)正確進(jìn)行并且能確保設(shè)門(mén)策略具有說(shuō)服力。
洗板時(shí)容易造成誤差:因?yàn)橄窗迨侨斯は吹?,所以判斷什么時(shí)候洗干凈了也是人為判斷的,這個(gè)時(shí)候帶有主觀(guān)色彩,所以多清洗幾次,還有就是在洗的時(shí)候孔與孔之間的液體容易交叉流動(dòng);
半抗原偶聯(lián)試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí),留神事項(xiàng)如下:
1.正式實(shí)驗(yàn)時(shí),應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照操控實(shí)驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以確保實(shí)驗(yàn)效果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高,說(shuō)明有非特異性反應(yīng),可選用羊血清、兔血清或BSA等關(guān)閉。
2.在半抗原偶聯(lián)試劑盒中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的挑選是很重要的,其間包含:
?。?)固相載體的挑選:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方式可所以凹孔平板、試管、珠粒等?,F(xiàn)在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在運(yùn)用前均可進(jìn)行挑選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),查詢(xún)其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附功用是否出色。
?。?)包被抗體(或抗原)的挑選:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)刻及其蛋白量也有必定影響,一般多選用4℃18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,半抗原偶聯(lián)試劑盒在其它實(shí)驗(yàn)條件相一起,查詢(xún)陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。挑選OD值大而蛋白量少的濃度。關(guān)于大都蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)一般為1~10μg/ml。