單克隆抗體反應(yīng)的特點(diǎn)及影響因素是什么
更新時(shí)間:2023-03-02 點(diǎn)擊次數(shù):549次
單克隆抗體反應(yīng)是指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。這種反應(yīng)既可在機(jī)體內(nèi)進(jìn)行,也可以在機(jī)體外進(jìn)行。反應(yīng)的過(guò)程是經(jīng)過(guò)一系列的化學(xué)和物理變化,包括抗原抗體特異性結(jié)合和非特異性促凝聚兩個(gè)階段,以及由親水膠體轉(zhuǎn)為疏水膠體的變化。
單克隆抗體反應(yīng)的特點(diǎn)主要有三性:即特異性、比例性、可逆性。
1、特異性是單克隆抗體反應(yīng)的最主要特征,這種特異性是由抗原決定簇和抗體分子的超變區(qū)之間空間結(jié)構(gòu)的互補(bǔ)性確定的。這種高度的特異性在傳染病的診斷與防治方面得到有效的應(yīng)用。隨著免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展進(jìn)步,還將在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域得到更加深入和廣泛的應(yīng)用,比如腫瘤的診斷和特異性治療等。
2、比例性是指抗原與抗體發(fā)生可見反應(yīng)需遵循一定的量比關(guān)系,只有當(dāng)二者濃度比例適當(dāng)時(shí)才出現(xiàn)可見反應(yīng),在單克隆抗體比例相當(dāng)或抗原稍過(guò)剩的情況下,反應(yīng)最徹di,形成的免疫復(fù)合物沉淀最多、最大。而當(dāng)抗原抗體比例超過(guò)此范圍時(shí),反應(yīng)速度和沉淀物量都會(huì)迅速降低甚至不出現(xiàn)反應(yīng)。
3、可逆性是指抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物后,在一定條件下又可解離恢復(fù)為抗原與抗體的特性。由于反應(yīng)是分子表面的非共價(jià)鍵結(jié)合,所形成的復(fù)合物并不牢固,可以隨時(shí)解離,解離后的抗原抗體仍保持原來(lái)的理化特征和生物學(xué)活性。
影響反應(yīng)的兩大因素:
抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合后,雖由親水膠體變?yōu)槭杷z體,若溶液中無(wú)電解質(zhì)參加,仍不出現(xiàn)可見反應(yīng)。為了促使沉淀物或凝集物的形成,常用0.85%氯化鈉或各種緩沖液作為抗原及抗體的稀釋液。由于氯化鈉在水溶液中解離成Na+和C1-,可分別中和膠體粒子上的電荷,使膠體粒子的電勢(shì)下降。當(dāng)電勢(shì)降至臨界電勢(shì)(12~15mV)以下時(shí),則能促使單克隆抗體復(fù)合物從溶液中析出,形成可見的沉淀物或凝集物。
1、溫度
在一定范圍內(nèi),溫度升高可加速分子運(yùn)動(dòng),抗原與抗體碰撞機(jī)會(huì)增多,使反應(yīng)加速。但若溫度高于56℃時(shí),可導(dǎo)致已結(jié)合的再解離,甚至變性或破壞;在40℃時(shí),結(jié)合速度慢,但結(jié)合牢固,更易于觀察。常用的反應(yīng)溫度為37℃。每種試驗(yàn)都有其*的*適反應(yīng)溫度,例如冷凝集素在4左右與紅細(xì)胞結(jié)合,20℃以上反而解離。此外,適當(dāng)振蕩也可促進(jìn)分子的接觸,加速反應(yīng)。
2、酸堿度
抗原抗體反應(yīng)在合適的pH環(huán)境中進(jìn)行。蛋白質(zhì)具有兩性電離性質(zhì),因此每種蛋白質(zhì)都有固定的等電點(diǎn)。單克隆抗體反應(yīng)一般在pH為6~8進(jìn)行。PH過(guò)高或過(guò)低都將影響抗原與抗體的理化性質(zhì),例如pH達(dá)到或接近抗原的等電點(diǎn)時(shí),即使無(wú)相應(yīng)抗體存在,也會(huì)引起顆粒性抗原非特異性的凝集,造成假陽(yáng)性反應(yīng)。